tugas bio sel molekuler
Karakterisasi Kloning dan Fungsional Early -
Spesifik Limfosit Gen Pb99
Gen Pb99 secara khusus dinyatakan dalam sel-sel pra-B dan thymocytes dan jaringan B dan sel T atau nonlymphoid tidak matang, hal itu menyiratkan bahwa dapat berfungsi pada awal pembangunan limfoid. Telah digambarkan kloning cDNA yang tidak lengkap untuk Pb99. Analisis yang berbeda klon cDNA Pb99 menyarankan bahwa setidaknya ada tiga bentuk protein Pb99 dihasilkan oleh pengolahan diferensial transkrip Pb99. Dengan membaca CDNA terbuka frame mengkodekan suatu protein terpanjang yang diduga memiliki tujuh hidrofobik domain mirip dengan tujuh membran-spanning protein, seperti klasik digabungkan protein G-reseptor. pembangunan limfoid dihasilkan oleh gen penargetan dan pembangunan limfosit dianalisis di tikus ini.
Isolasi gen diekspresikan selama pembangunan B-dan T-sel telah menghasilkan informasi yang berharga tentang dasar molekuler pembangunan limfosit. Gen ini termasuk yang berperan menyandi faktor transkripsi,signaling protein, anggota reseptor antigen kompleks, dan protein yang terlibat dalam rekombinasi gen reseptor antigen. Sebagai contoh, rekombinasi – mengaktifkan gen 1 dan 2 dinyatakan pada awal B dan T menyandikan sel dan protein yang memperkenalkan beruntai ganda DNA istirahat di persimpangan variabel segmen gen coding dan sinyal urutan dan dengan demikian sangat penting untuk V (D) J rekombinasi dan pembangunan limfosit.
Namun, penelitian ini memfokuskan perhatian peran gen ini dalam pembangunan limfosit. Dalam hal ini, sebelumnya Pb99 dinyatakan pada awal baris B-sel sampai pra-B-sel panggung dan di pra-sel T di timus tetapi tidak matang dalam jaringan limfoid atau nonlymphoid. Pola ekspresi yang terbatas menunjukkan bahwa pembangunan fungsi protein Pb99 pada awal B-dan T-sel. Untuk membantu menentukan peran protein dalam pembangunan limfosit Pb99, dianalisis tikus kekurangan Pb99 yang dihasilkan oleh penargetan gen.
Telah diuraikan sebelumnya kloning dari beberapa gen yang dinyatakan dalam sel B matang oleh subtraktif hibridisasi dan tertarik untuk lebih mendefinisikan peran gen ini dalam mengatur pembangunan limfosit. Di sini kita memperluas analisis untuk menyertakan gen Pb99, yang dinyatakan secara eksklusif pada awal B dan sel T dan, karenanya, fungsi kemungkinan selama pembangunan B- dan T-sel. Dalam studi ini digambarkan kloning molekuler panjang penuh Pb99 cDNA dan Pb99 klon genomik. Analisis ini mengungkapkan bahwa gen Pb99 murine rentang jarak lebih dari 30 kb dan bahwa setidaknya tiga bentuk yang berbeda dari protein mungkin ada didasarkan pada pengolahan diferensial transkrip.
Pb99 dipetakan dalam daerah peta komposit yang tidak memiliki mutasi tikus dengan sebuah fenotipe yang mungkin diharapkan untuk sebuah perubahan dalam lokus. Wilayah tengah mouse kromosom 8 saham homologi daerah 19p manusia dan 16q. Secara khusus, Gnao telah dipetakan untuk 16q13. Hubungan erat antara Pb99 di Gnao dan mouse menunjukkan bahwa homolog manusia dari Pb99 akan dipetakan menjadi 16q13 sangat baik.
Analisis prediksi urutan asam amino Pb99.2 menunjukkan bahwa mengandung peptida sinyal hidrofobik dan tujuh hidrofobik berbeda domain, menunjukkan bahwa hal itu mungkin merupakan membran protein integral membran yang mencakup tujuh kali, mirip dengan klasik digabungkan G protein reseptor. Perbandingan dengan urutan dilaporkan dalam database mengungkapkan bahwa saham Pb99 homologi dengan beberapa diduga tujuh membran-spanning protein. Terutama, Pb99 saham beberapa homologi dengan anggota baru dijelaskan EGF-TM7 subfamili dari permukaan sel reseptor, yang dinyatakan terutama pada sel-sel darah putih.
